Molecular Transport and Lysis Reagent (MTLR)

Nucleogene MTLR bufferı alınan örneklerden, slika spin kolon yada manyetik boncuk yardımıyla yüksek kalitede nükleik asit (DNA/RNA) elde etmesini sağlar. MTLR bufferı, elde edilen DNA yada RNA’yı herhangi bir oksidatif, hidroliz yada nükleaz bozunması olmadan uzun süre stabil halde tutabilmek için tasarlanmıştır.

Ayrıca MTLR bufferı biyolojik bulaşıcı patojenleri ortadan kaldırarak güvenli bir taşıma solüsyonu olarakta görev yapar. Bu sayede örnekten alınan RNA yı 7 gün boyunca oda sıcaklığında, +4 ° C’de 25 gün boyunca stabil halde tutar.

MANYETİK BONCUK

• MTLR ve manyetik boncukları içeren tüp içine numune eklenir ve 30-50 dakika aralığında bekletilir. (Numunenin laboratuvara taşınma süresi bu şekilde değerlendirilebilir.)

2-            Taşıma işleminden sonra, tüpü manyetik standa yerleştirin ve tamamen manyetik etki gösterene kadar 30 saniye bekleyin. Boncuklar manyetizma etkisiyle dipte toplanmıştır, üstte kalan sıvı kısmın tamamını pipetle atınız. Ayrıca, tüpten pamuklu çubuk veya numune artıklarını da atınız.

3-            Tüpü manyetik standdan alınız, 500 µl% 80 etanol ekleyin ve iyice karıştırın.

4-            Tüpü manyetik standa koyunuz ve tüm manyetik boncuklar dibe çökene kadar 30 saniye bekleyiniz  ve sıvının tamamını pipetleyiniz.

* Gerekirse 3. ve 4. Adımlar tekrarlanmalıdır.

5- Tüpleri 40 ° C’de 3 dakika inkübe ediniz veya kapakları açık olarak 5 dakika oda sıcaklığında bekleterek kalan etanolün buharlaşmasını sağlayınız.

6-  Tüplere 50 μL Nükleaz Free Suyu aktarınız, 70 ° C’ye ısıtınız, daha sonra vorteksleyiniz veya pipetle iyice karıştırınız ve oda sıcaklığında 1-3 dakika aralığında inkübe ediniz.

7- İnkübasyondan sonra, tüpleri manyetik standa yerleştiriniz ve 30 saniye bekleyiniz. Manyetik boncuklar dipte toplandıktan sonra  tüm sıvı kısmı pipetlenir ve başka bir tüpe aktarılır.

8- Alınan sıvı nukleik asit içerir ve kullanıma hazırdır. Uzun süreli saklama için DNA

-20 ° C’de ve RNA’da -80 ° C’de saklanır.

 

SPİN KOLON

1-            MTLR  içeren tüp içine numune eklenir ve 30-50 dakika aralığında bekletilir. (Numunenin laboratuvara taşınma süresi bu şekilde değerlendirilebilir.)

2-            Taşıma sonrasında tüp içerisindeki tüm sıvı kısım bir pipet ile çekilir ve spin kolunun bulunduğu tüpe aktarılır.

3-            Tüp, 8000 x g’de bir dakika süreyle santrifüjlenir.

4-            Collection tüpte biriken sıvı atılır ve spin kolon collection tüpe geri yerleştirilir.

5-            500 µl% 80’lik etanol spin kolona aktarılır ve tüp 8000 x g’de 1 dakika santrifüjlenir.

6-            Collection tüpte biriken sıvı atılır ve spin kolon collection tüpe geri yerleştirilir.

7-            Spin kolon bir dakika boyunca 16000 xg’de (veya maksimum hızda) santrifüjlenir.

8-            Spin kolon, 1.5 ml’lik bir mikrosantrifüj tüpüne yerleştirilir.

9-            Spin kolonun ortasına 50 µl Nükleaz Free su eklenir ve oda sıcaklığında 1 dakika beklenir.

10-         Spin kolon 8000 x g’de bir dakika santrifüjlenir. Tüpte kalan sıvı DNA / RNA içerir. Uzun süreli saklama için DNA -20 ° C’de ve RNA -80 ° C’de saklanır.